檔案名稱：pfu.htm

生工給您真正的PCR（Polymerase Cost Reduction）

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贈品表：
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3.	1Kb DNA Ladder Marker一支 (50ug，100次，原價1,000元)
4.	Agarose LE (50g，原價1,470元)
5.	L.B. Broth (500g，原價1,470元)

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產品資料

產品代碼：

102-9012-90-2

簡介：

Pfu核酸聚合脢是從高溫嗜熱菌Pyrococcus furiosis分離出的高準度(High Fidelity)耐熱性核酸聚合脢。Pfu核酸聚合脢能校正DNA在PCR過程中產生的錯誤，而傳統的耐熱性核酸聚合脢Taq、Tth，及它們的相關產品如AmpilTaq與KlenTaq等，都無法更正錯誤。耐熱性核酸聚合脢Vent、Deep Vent、Tli、Pwo、Pfu與UlTma等都具有校正功能(Proof reading)，但Pfu核酸聚合脢是目前已發現的所有耐熱性核酸聚合脢中擴增DNA時錯誤率(Error Rate)最低的產品。Pfu之錯誤率比Taq及相關產品低10倍，比Vent和Pwo低2-4倍，比UlTma低30倍。如將其它的耐熱性核酸聚合脢與Pfu核酸聚合脢混合使用可以降低產品的錯誤率，但準確度不如單獨使用Pfu核酸聚合脢。在基因選殖、基因表達及基因突變分析等分子生物實驗操作中，由於對DNA擴增產物的正確率要求較高，常常希望萬無一失，Pfu是公認取代Taq的最佳選擇。

濃度：

5U/uL

錯誤率：

10^-6

10X反應液：

100mM KCl
160mM (NH₄)₂SO₄
20mM MgSO₄
200mM Tris-HCl(pH8.8)
1% Trition X-100
1mg/mL BSA

品質管制：

1.	無外來核酸脢活性。
2.	SDS-PAGE純度大於95%。
3.	以PCR方法檢測無外來DNA。
4.	能自100ng的Lambda模板中特異性擴增出1Kb及2Kb之單套（Single Copy）基因。

保存液：

50mM Tris-HCl(pH8.2)
0.1mM EDTA
0.1% Tween20
0.1% NP-40
1mM DTT
50% Glycerol

保存條件：

-20℃

參考資料：

Pfu核酸聚合脢來源為高溫嗜熱菌Pyrococcus furiosis，分子量為90KD。以Pfu核酸聚合脢擴增得到的PCR產物兩端為平端(Blunt End)，3'端無A鹼基突出。Pfu核酸聚合脢有3'端向5'端之外切脢活性(錯誤校正功能)，無5'端向3'端之外切脢活性。聚合時延伸速度為每分鐘600鹼基，最佳溫度為65-75℃，dNTP工作濃度為100-300uM，最佳鎂離子濃度為2-3mM，最佳pH為8.1-9.1。

使用方法：

Pfu的使用方法與Taq相同，50uL標準反應液中約需Pfu核酸聚合脢2.5U左右。

注意事項：

1.	Pfu擴增效率通常比Taq為低，主因為Pfu核酸聚合脢具有3'端向5'端之外切脢活性(錯誤校正功能)，並非Pfu核酸聚合脢品質不穩定。Pfu在擴增2Kb以下的DNA片段時，與Taq差別不大。
2.	10X反應液中已含有鎂離子，使用該反應液能確保擴增產物的正確性。提高反應液的pH與鎂離子濃度能提高擴增的產率，但產物的正確性將會下降。一般不建議以Taq反應液代替Pfu反應液進行高準度DNA擴增反應。
3.	使用Pfu核酸聚合脢進行擴增反應時，引子純度要求較高，長度必須大於18個鹼基，Tm值介於55至80℃間，引子濃度則在0.1至0.5uM之間，比Taq略高。Pfu核酸聚合脢具有3'端向5'端之外切脢活性(錯誤校正功能)，可能會分解引子，特別是在溶液中沒有dNTP時。因此，Pfu核酸聚合脢必須最後加入反應體系中，並於加入後立即進行擴增反應。
4.	Pfu的熱穩定性比Taq略高，對於GC含量高的模版，開鏈溫度提高到98℃亦不會影響Pfu核酸聚合脢的活性。
5.	以Pfu核酸聚合脢擴增之PCR產物兩端為平端(Blunt End)，無3'端A鹼基突出，不能直接進行TA選殖，必須使用加A(A-Tailing)套件處理後，方可進行TA選殖。

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中華民國97年10月03日更新